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    植物超氧陰離子染色液(NBT法)使用說明
    發布時間:2023-04-21   點擊次數:22次

    植物超氧陰離子染色液(NBT法)使用說明


     

    產品簡介

    植物組織在脅迫環境條件下會產生多種活性氧(ROS),ROS活性非常大且其不穩定,因此ROS的檢測通常因其終產物而定。超氧陰離子是活性氧的一種,屬于一種含氧自由基,能將NBT(氮藍四唑)還原成不溶于水的藍色甲瓚化合物,從而定位組織中的超氧陰離子。根據基本原理也稱其為NBT法。本產品就是基于以上原理,用于植物活組織中的超氧陰離子染色。一般應用于較嫩的根尖、葉片等的整體染色,染色后有超氧陰離子聚集的部位呈藍色至深藍色。

    儲存與運輸

    冰袋(wet ice)運輸;4℃避光保存,有效期12個月。

     

    組成

    組分

    規格

    保存

    NBT

    50mg

    4℃

    Tris緩沖液(pH7.4)

    100ml

    RT

    NBT樣本保存液

    2*100ml

    RT

    說明書

    1份

     

    使用方法

    1. 試劑準備:將50 mg NBT以Tris緩沖液(pH 7.4) 100 mL充分溶解,得到NBT染色工作液,避光4℃保存,一周內有效。

    2. 采集植物幼苗或根尖,純水稍洗凈,濾紙上吸干多余水分。將植物幼苗或根尖浸入NBT染色工作液中,常溫避光浸染2-6 h,至陽性部位出現深藍色,其余部位為淡藍色或近無色或呈植物本身的顏色即可(根據植物幼嫩程度。顯色程度調整染色時間)。

    3. 用鑷子將植物幼苗或者葉片小心取出,純水漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h,目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素或者淡藍色背景,處理期間可多次更換新鮮的95%乙醇。

    4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片,浸入純水中來回漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,將樣本轉入適量NBT樣本保存液中浸泡30 min后,隨后可取出拍照。樣本可置于該溶液中常溫保存一周。

     

    注意事項

    1. NBT染色工作液配制好以后需4℃避光保存,一周內使用。存放時間過久,會影響顯色。

    2. 因任何外在因素都可能刺激植物應激產生超氧陰離子,因此植物樣本需要新鮮采集,并盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對照組。

    3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結果。

    4. 操作時請穿實驗服,并佩戴一次性手套。


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